Citometria de flux este o tehnică de diagnostic și cercetare cunoscută de mulți ani și utilizată pe scară largă în oncologie. Citometria de flux permite celulelor care alcătuiesc suspensia într-un flux laminar sau stratificat de lichid să fie examinate cu un dispozitiv numit citometru de flux. Care sunt indicațiile pentru citometria în flux și cum se face?
Citometria de flux este utilizată în diagnosticul neoplasmelor hematologice, deoarece acestea sunt tumori lichide, dar este doar o metodă auxiliară. Cu toate acestea, merită să ne amintim că există un singur cancer care poate fi diagnosticat numai cu această metodă. Aceasta este leucemie limfocitară cronică.
Pentru alte boli neoplazice, citometria în flux este utilizată ca ajutor diagnostic, deoarece prezintă caracteristici foarte importante ale celulelor neoplazice. Această metodă este, de asemenea, utilizată pentru a evalua eficacitatea tratamentului aplicat.
Citometrie de flux - ce arată?
Fluxul de lichid care conține particulele testate este trecut cu o viteză constantă (100-2000 particule pe secundă) prin zona de măsurare a citometrului. Aici, metodele optice analizează forme, dimensiuni, structura internă a celulelor și conținutul acestora, de exemplu ADN. Toate celulele sunt etichetate optic.
Măsurătorile se bazează pe proprietățile de împrăștiere a luminii laser de către celulele individuale sau componentele acestora (nuclei, cromozomi, mitocondrii) sau fluorescența indusă de acestea.
Semnalele optice sunt convertite în semnale electrice care, după ce au fost analizate, sunt prezentate grafic ca distribuții mono- sau biparametrice.
Citometrul permite, de asemenea, segregarea particulelor după ieșirea din zona de măsurare. Se poate spune că aparatul aranjează (separă) celulele cu aceleași elemente constitutive (sortare pregătitoare) sau extrage tipuri specifice de celule (sortare analitică).
Citometria de flux permite studierea caracteristicilor populației celulelor, analiza componentelor celulare (în special cum ar fi acizii nucleici, proteinele, antigenele de suprafață și celulare), activitatea enzimatică, potențialul membranei, activitatea mitocondrială, pH-ul intracelular, transportul ionilor și fluiditatea membranei.
Citometrie de flux - aplicare
Citometria în flux utilizată în diagnosticare permite determinarea fenotipului celulelor neoplazice și expresia proteinelor individuale. Pentru a realiza acest lucru, se folosesc anticorpi fluorescenți marcați care se leagă într-o manieră caracteristică de antigeni de pe suprafața membranei celulare. Datorită acestui fapt, este posibil să se determine gradul de diferențiere, origine, markeri prognostici și terapeutici ai acestora, care facilitează decizia privind procedurile ulterioare de diagnostic și terapeutice.
O altă aplicație pentru citometria în flux este monitorizarea eficacității tratamentului aplicat prin evaluarea așa-numitelor „boală reziduală”, care reprezintă proporția de celule cu fenotipuri asemănătoare tumorii care rămân după tratament.
Citometria de flux facilitează, de asemenea, cercetarea bolilor de cancer. Datorită acestei metode, este posibil să căutați, de exemplu, receptori care sunt localizați pe suprafața celulelor neoplazice și care pot deveni ținte ale tratamentului.
Metoda permite evaluarea activității proteinelor din interiorul celulei. De asemenea, este posibil să se evalueze ciclul celular, de exemplu prin determinarea cantității de ADN din celulă.
În cursul proliferării, o celulă trece prin faze ale ciclului celular în care dublează cantitatea de ADN. Prin evaluarea acestei cantități, este posibil să se indice în ce fază se află celulele, dacă proliferează sau nu sau dacă intră în apoptoză. Cu alte cuvinte, cu ajutorul citometriei în flux puteți afla dacă celulele se pregătesc pentru apoptoză, procesul de moarte programat.
Citometria de flux - viitorul
Citometria de flux este cunoscută și utilizată în medicină de câteva decenii. Cu toate acestea, este în mod constant îmbunătățit și creează noi posibilități de diagnostic și cercetare. În prima perioadă de utilizare a acestei metode, a fost posibilă doar determinarea dimensiunii și gradului de granularitate a celulelor.
Utilizarea luminii laser în dispozitivele de citometrie în flux vă permite să excitați anumiți markeri fluorescenți și apoi să evaluați emisia acestora. Citometrele moderne permit o creștere semnificativă a numărului de markeri care sunt evaluați odată, ceea ce se traduce cu siguranță într-o creștere a sensibilității acestei metode.
De aceea este utilizat nu numai în diagnosticul bolilor neoplazice, ci și pentru a evalua eficacitatea tratamentului.
Despre autor
Citiți mai multe articole ale acestui autor
